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乙酰胆碱酯酶染色液(亚铁氰化铜法)属于Karnovsky和Roots法，其染色原理是乙酰胆碱酯酶水解碘化乙酰硫代胆碱，释放乙酸和硫代胆碱，硫代胆碱中的硫氢基(-SH)把铁氰化钾还原为亚铁氰化钾，后者与铜离子结合形成不溶性的红棕色至深棕色的亚铁氰化铜沉淀在酶活性部位而显示出来。该染色液优点是操作简便、酯酶的扩散较少，其缺点是对底物对组织的渗透性较差，可用于观察中枢神经和周围神经纤维等疾病情况下的改变，亦有利于巨结肠症、肠神经元发育异常的诊断，有机农药中毒时可使该酶受到抑制，酶的活性下降而呈阴性反应。

胆碱酯酶(cholinesterase，ChE)属于特异性酯酶，可分为两大类，一类是乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase，AChE)又称为真性胆碱酯酶，能水解乙酰胆碱，起到生理的调节作用；另一类为胆碱酯酶，又称假性胆碱酯酶(Pseudo cholinesterase，PsChE)，能水解胆碱的酯而不能水解乙酰胆碱酯，乙酰胆碱酯酶主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处；PsChE主要存在于血浆、胰腺、唾液腺内，生理功能尚不明确。

• 10%甲醛钙固定液、二甲苯或环保脱蜡透明液、甘油明胶
  
• 恒温箱或水浴锅、染色缸、光学显微镜

• 该染色液适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 冰冻切片，厚6μm，不固定或置于提前预冷的的10%甲醛钙固定10min。
  
• 蒸馏水洗3次，每次1min。
  
• 配制AChE孵育液：临用前，取A2加入至A1中，使后者完全溶解，即为A12混合液，4℃保存；取适量的A12混合液、A3、A4、A5、A6，按A12∶A3∶A4∶A5∶A6=1∶7∶1∶1∶0.2充分混合，即为AChE孵育液，6h内使用。
  
  • 如果想显示AChE和ChE，即无需区分AChE和ChE，无需加入Iso-OMPA。
• 切片入预温的AChE孵育液37℃避光孵育1～3h(一般不超过6h)，至切片呈淡棕色时取出。
  
• 蒸馏水洗，镜下观察如活性部位仍较淡，可于蒸馏水洗后再进行孵育，至反应合适为止。
  
• 流水冲洗5min。
  
• 滴加苏木素染色液浅染细胞核3～5min，流水冲洗10min。
  
• 封固，镜检。